The Optimal Immunohistochemical Staining Conditions for Engrailed 1 Protein

Abstract

Background: The optimal immunohistochemical staining condition is associated with the accuracy of evaluating an expression of tissue proteins. Objective: To standardise the immunohistochemical staining conditions of EN1 protein expression in invasive breast carcinoma. Methods: This study was to retrieve engrailed 1 (EN1) protein in the breast carcinoma tissue sections by using 1x10 mM sodium citrate buffer solution of pH 6.0 with a microwave antigen retrieval at 650, 700, and 750 watts for 5, 10, 15, and 20 minutes. Anti-human EN1 mouse monoclonal primary antibody (1 ํAb) concentrations of 1.0, 2.5, 5.0, and 10.0 μg/mL were used for determining EN1 protein expression in the nuclei. Results: The results showed that normal mammary epithelial cells and malignant cells in the same tissue section microscopically revealed the greatest contrast between their nuclear immunoexpression of EN1 protein and nonspecific background immunostaining after microwaving. Conclusion: An expression of EN1 gene is distinctly detectable in the FFPE-TS-PIBC by MAR with SCBS at 700 watts for 10 minutes and using a 1 ํAb concentration of 10.0 μg/mL.

สภาวะที่เหมาะสมของการย้อมอิมมูโนฮีสโตเคมีสำหรับโปรตีนเอนเกรล 1

ความเป็นมา สภาวะที่เหมาะสมของการย้อมอิมมูโนฮีสโตเคมี เกี่ยวข้องกับความถูกต้องในการประเมินการแสดงออกของโปรตีนในเนื้อเยื่อ วัตถุประสงค์ เพื่อวางมาตรฐานของการย้อมอิมมูโนฮีสโตเคมีในการประเมินการแสดงออกของโปรตีนในเนื้อเยื่อ วิธีการ การศึกษานี้ได้ทำการคืนสภาพโปรตีนเอนเกรล 1 (อีเอน 1) ในเนื้อเยื่อมะเร็งเต้านมชนิดคาร์ซิโนมาโดยใช้สารละลายบัฟเฟอร์โซเดียมซิเตรตที่มีความเข้มข้นหนึ่งเท่าของ 10 มิลลิโมลาร์และมีค่าพีเฮช 6.0 พร้อมกับให้ความร้อนจากเตาไมโครเวฟที่กำลังไฟฟ้า 650, 700 และ750 วัตต์ โดยแต่ละค่าของกำลังไฟฟ้าจะใช้เวลาอบนาน 5, 10, 15 และ 20 นาที จากนั้นประเมินการแสดงออกของโปรตีนอีเอน 1 ที่นิวเคลียสของเซลล์ด้วยสารละลายแอนติบอดี้ที่ระดับความเข้มข้น 1.0, 2.5, 5.0 และ 10.0 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร ผลการวิจัย พบว่าการใช้คลื่นไมโครเวฟที่กำลังไฟฟ้า 700 วัตต์ นาน 10 นาที และความเข้มข้นของสารละลายแอนติบอดี้ต่อโปรตีนอีเอน 1 ที่ระดับ10.0 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร มีความเหมาะสมที่สุดสำหรับการแยกความแตกต่างของการแสดงออกของโปรตีนอีเอน 1 ในนิวเคลียสของเซลล์เยื่อบุผิวของต่อมน้ำนมปกติและเซลล์มะเร็งที่อยู่ในชิ้นเนื้อเยื่อเดียวกัน สรุป การแสดงออกของโปรตีนอีเอน 1 สามารถตรวจพบได้โดยการย้อมอิมมูโนฮีสโตเคมี