การพัฒนาวิธีการตรวจเอกลักษณ์สำหรับเภสัชภัณฑ์ streptokinase โดยวิธี SDS-PAGE/Western Blot เพื่อทดแทนวิธีวิเคราะห์ตามเภสัชตำรับ
บทคัดย่อ
Streptokinase ใช้ในการรักษาโรคหลอดเลือดอุดตัน เช่น โรคหลอดเลือดสมองตีบตัน (Stroke) เนื่องจากในปัจจุบันยา streptokinase มีราคาสูง จึงมีการลักลอบนำเข้ามาใช้ในประเทศแบบผิดกฎหมายตามพระราชบัญญัติยา พ.ศ. 2510 บทลงโทษผู้กระทำผิดจะทำได้เมื่อมีการพิสูจน์ได้ว่าของกลางคือยา ดังนั้นการตรวจพิสูจน์เอกลักษณ์ยา streptokinase จึงมีความสำคัญในกระบวนการพิสูจน์หลักฐานวิธีการตรวจเอกลักษณ์ยา streptokinase ในเภสัชตำรับสากลจำเป็นต้องใช้พลาสม่าจากสัตว์ทดลอง ซึ่งขัดแย้งกับการพยายามลดการใช้สัตว์ทดลองในการตรวจวิเคราะห์ยา ซึ่งปัจจุบันเป็นที่ยอมรับและถือปฏิบัติทั่วโลก การศึกษานี้จึงมีเป้าหมายในการพัฒนาวิธีการตรวจเอกลักษณ์ยา streptokinase โดยวิธี sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) ร่วมกับวิธี Western Blot เพื่อทดแทนวิธีตามเภสัชตำรับสากลการศึกษาความถูกต้องของวิธีวิเคราะห์มีการศึกษาปัจจัยที่เกี่ยวข้องที่มีผลต่อวิธีวิเคราะห์ เช่น ความเข้มข้นของแอนติบอดีทั้งชนิดปฐมภูมิและทุติยภูมิระยะเวลาการบ่ม และปริมาณต่ำสุดของ streptokinase ที่สามารถตรวจพบในสารมาตรฐานและในเภสัชภัณฑ์ จากการศึกษาพบว่าความเข้มข้นที่เหมาะสมสำหรับแอนติบอดีชนิดปฐมภูมิและทุติยภูมิคือ 7.5 × 10-3 และ 2 × 10-3 mg/ml ตามลำดับ โดยมีระยะเวลาที่เหมาะสม ในการบ่มสำหรับแอนติบอดีทั้งสองชนิดที่ 1 ชั่วโมง ปริมาณ streptokinase ต่ำสุดที่ตรวจพบในสารมาตรฐานและในเภสัชภัณฑ์ คือที่ความเข้มข้น 0.5 and 20 IU/ml ตามลำดับ นอกจากนี้ในการศึกษาพบว่าอัลบูมินที่ใส่ในเภสัชภัณฑ์ยา streptokinase เพื่อเป็นสารทำให้ตำรับคงตัวไม่รบกวนวิธีวิเคราะห์ดังกล่าว ผลจากการศึกษานี้ชี้ให้เห็นว่าวิธีวิเคราะห์ที่พัฒนาขึ้นเป็นวิธีที่เชื่อถือได้สามารถนำไปใช้ในการตรวจเอกลักษณ์ยา streptokinase ในเภสัชภัณฑ์ได้
References
Jackson KW, Tang J. Complete amino acid sequence of streptokinase and its homology with serine proteases. Biochemistry 1982; 21(26): 6620-25.
Castellino FJ, Sodetz JM, Brockway WJ, Siefring GE. Streptokinase. Methods Enzymol 1976; 45: 244-57.
Schick LA, Castellino FJ. Direct evidence for the generation of an active site in the plasminogen moiety of the streptokinase-human plasminogen activator complex. Biochem Biophys Res Commun 1974; 57: 47-54.
Mahmoudi S, Abtahi H, Bahador A, Mosayebi G, Salmanian AH. Production of recombinant streptokinase in E. coli and reactivity with immunized mice. Pak J Biol Sci 2010; 13: 380-4.
Babashamsi M, Razavian MH, Nejadmoghaddam MR. Production and purification of streptokinase by protected affinity chromatography. Avicenna J Med Biotechnol 2009; 1: 47-51.
Karimi Z, Babashamsi M, Asqarani E, Niakan M, Salimi A. Fermentation, fractionation and purification of streptokinase by chemical reduction method. Iran J Microbiol 2011; 3(1): 42-6.
Banerjee A, Chisti Y, Banerjee UC. Streptokinase--a clinically useful thrombolytic agent. Biotechnol Adv 2004; 22(4): 287-307.
Erdogan S, Ozer AY, Volkan B, Caner B, Bilgili H. Thrombus localization by using streptokinase containing vesicular systems. Drug Deliv 2006; 13(4): 303-9.
Drug “Streptokinase” Price list. [online]. 2014; [5 screens]. Available from: URL: http://www.medindia.net/drug-price/streptokinase.htm
Streptokinase trade name in Thailand. [online]. 2014; [1 screens]. Available from: URL: http://fdaolap.fda.moph.go.th/logistics/drgdrug/DSerch.asp
Arun KKV, Pulak M. Development of bioassay for a therapeutic protein obtained from recombinant Escherichia Coli. Int J Pharm Biomed Res 2011; 2(5): 137-49.
Felsia XF, Vijayakumar R, Kalpana S. Production and partial purification of streptokinase from Streptococcus pyogenes. J Biochem Tech 2011; 3(3): 289-91.
Dubey R, Kumar J, Agrawala D, Char T, Pusp P. Isolation, production, purification, assay and characterization of fibrinolytic enzymes (Nattokinase, Streptokinase and Urokinase) from bacterial sources. Afr J Biotechnol 2011; 10(8): 1408-20.
Burnette WN. Western blotting: electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate--polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A. Anal Biochem 1981; 112(2): 195–203.
Downloads
เผยแพร่แล้ว
How to Cite
ฉบับ
บท
License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
