การตรวจหาดีเอ็นเอปนเปื้อนจาก host cell ในยาที่ผลิตโดยเทคโนโลยีชีวภาพ
คำสำคัญ:
residual host cell DNA, E. coli K-12, PCR, human insulinบทคัดย่อ
ในการผลิต recombinant protein เพื่อใช้เป็นยารักษาโรคสำหรับมนุษย์ได้มีการนำ Escherichia coli K-12 มาใช้เป็นเซลล์เจ้าบ้าน (host cell) ดีเอ็นเอจากเซลล์เจ้าบ้านเป็นสารปนเปื้อนที่สำคัญชนิดหนึ่งที่จะต้องถูกกำจัดออกไปในระหว่างขั้นตอนการผลิต ด้วยเหตุนี้จึงต้องมีการกำหนดปริมาณการปนเปื้อนของดีเอ็นเอจากเซลล์เจ้าบ้านในวัตถุดิบตัวยาสำคัญ วิธีการที่ใช้ในการตรวจดีเอ็นเอปนเปื้อนจากเซลล์เจ้าบ้านควรเป็นวิธีที่มีความรวดเร็ว จำเพาะ และมีความไว การศึกษาในครั้งนี้จึงได้พัฒนาวิธี Polymerase Chain Reaction (PCR) เพื่อใช้ตรวจหาการปนเปื้อนดีเอ็นเอจาก E. coli K-12 ในยาอินซูลินของมนุษย์และยังได้ทำการทดสอบความถูกต้องของวิธีนี้ด้วย ผลการทดสอบพบว่าวิธี PCR ที่ใช้ตรวจหาดีเอ็นเอจาก E. coli K-12 ในยาอินซูลินของมนุษย์นี้มีขีดจำกัดของการตรวจวิเคราะห์ ความจำเพาะ ความถูกต้อง ความแม่นยำ และความคงทนเป็นไปตามเกณฑ์มาตรฐานการทดสอบความถูกต้องของอาเซียน และสามารถดำเนินการทดสอบตั้งแต่ขั้นตอนการสกัดดีเอ็นเอจากตัวอย่าง การทำปฏิกิริยา PCR และการตรวจวิเคราะห์ผลแล้วเสร็จภายใน 1 วัน วิธีนี้จึงเหมาะสำหรับตรวจหาดีเอ็นเอจาก E. coli K-12 ที่ปนเปื้อนในวัตถุดิบอินซูลินของมนุษย์ได้
References
กองควบคุมยา สำนักงานคณะกรรมการอาหารและยา, ผู้รวบรวม. ASEAN analytical validation guideline. กรุงเทพฯ. โรงพิมพ์ชุมนุมสหกรณ์การเกษตรแห่งประเทศไทย. 2549.
Pickup J. Human insulin. Br Med J 1986; 292(6514): 155-7.
National Institutes of Health, U.S. Department of Health and Human Service. Guidelines for research involving recombinant or synthetic nucleic acid molecules. 2013; [cited 2013 Jan 10]; [132 screens]. Available from: URL: http://oba.od.nih.gov/oba/rac/Guideline/NIH_Guidelines.htm
U.S. Environmental Protection Agency. Escherichia coli K-12 derivatives final risk assessment. 1997; [cited 2013 Jul 9]; [11 screens]. Available from: URL: http://epa.gov/oppt/biotech/pubs/fra/fra004.htm
International Conference on Harmonisation of Technical Requirement for Registration of Pharmaceuticals for Human Use. Specification: test procedures and acceptance criteria for biotechnological/biological products Q6B. Geneva: ICH; 1999.
U.S. Department of Health and Human Service Food and Drug Administration. Points to consider in the manufacture and testing of monoclonal antibody products for human use. 1997; [cited 2013 Jan 20]; [50 screens]. Available from: URL: http://www.fda.gov/cber/gdlns/ptc_mab.pdf
The European Agency for the Evaluation of Medicinal Products. Position statement on the use of tumourigenic cells of human origin for the production of biological and biotechnological medicinal products. 2001; [cited 2013 Jan 20]; [5 screens]. Available from: URL: http://www.tga.gov.au/pdf/euguide/bwp114300en.pdf
World Health Organization. Acceptability of cell substrates for production of biologicals. 1987; [cited 2013 Jan 20]; [32 screens]. Available from: URL: http://whqlibdoc.who.int/trs/WHO_TRS_747.pdf
U.S. Pharmacopeial Convention. General Chapter<1130> Nucleic acid-based techniques-approaches for detecting trace nucleic acids (residual DNA testing). 2012; [cited 2013 Mar 15]; [5 screens]. Available from: URL: http://usp35.infostar.com.cn/uspnf/pub/data/v35300/usp35nf30s0_c1130.html
Mehta S, Keer JT. Performance characteristics of host-cell DNA quantification methods. Bio Process Technical. [serial online]. 2007 oct; [cited 2013 Jan 30]; [8 screens]. Available From: URL: http://www.bioprocessintl.com/multimedia/archive/00076/070509ar06_76445a.pdf
Kuhnert P, Nicolet J, Frey J. Rapid and accurate identification of Escherichia coli K-12 strains. Appl Environ Microbiol 1995; 61(11): 4135-9.
Cai H, Gu X, Scanlan MS, Lively CR. Development of a quantitative PCR assay for residual mouse DNA and comparison of four sample purification methods for DNA isolation. J Pharm Biomed Anal 2011; 55(1): 71-7.
Kuhnert P, Frey J. Tools for safety assessment identification and monitoring of Escherichia coli K-12 safety strains. 1996; [cited 2012 dec 25]; [4 screens]. Available from: URL: http://www.bats.ch/bats/publikationen/1996-1_e.coli/96-1_e-coli_k12.php
Goldman M, Geier M, Zehnder D, Wang A, Henriksson T. Use of polymerase chain reaction for detecting DNA contaminants in pharmaceutical recombinant. Clin Chem 1991; 37(9): 1523-5.
Roche Applied Science. FastStart Taq DNA polymerase, dNTPack manual. 2011; [cited 2013 May 26]; [19 screens]. Available from: URL: https://cssportal.roche.com/LFR_PublicDocs/ras/04738314001_en_06.pdf
Singer VL, Lawlor TE, Yue S. Comparison of SYBR Green I nucleic acid gel stain mutagenicity and ethidium bromide mutagenicity in the Salmonella/mammalian microsome reverse mutation assay (Ames test). Mutat Res 1999; 439(1): 37-47.
Skoblov MY, Shibanova ED, Kovaleva EV, Bairamashvilli DI, Skoblov YS, Miroshnikov AI. DNA assay for recombinant pharmaceutical substances using the real-time PCR technique. Russ J Bioorg Chem 2010; 36(1): 104-8.
Lee DH, Bae JE, Lee JH, Shin JS, Kim IS. Quantitative detection of residual E. coli host cell DNA by real-time PCR. J Microbiol Biotechnol 2010; 20(10): 1463-70.
Downloads
เผยแพร่แล้ว
How to Cite
ฉบับ
บท
License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
