การผลิต Pseudovirion ของ HPV สายพันธุ์ 16 เพื่อการพัฒนาวิธี Pseudovirion-Based Neutralization Assay (PBNA)
การผลิต HPV-16 Pseudovirion สำหรับ PBNA
คำสำคัญ:
การผลิต pseudovirion ของ HPV สายพันธุ์ 16, การเหนี่ยวนำพลาสมิดเข้าสู่เซลล์, Pseudovirion-based neutralization assay (PBNA)บทคัดย่อ
การติดเชื้อ human papillomavirus (HPV) มีความสัมพันธ์กับการเกิดมะเร็งปากมดลูก มาตรการในการลดความเสี่ยง คือ การฉีดวัคซีนเพื่อป้องกันการติดเชื้อ HPV ทั้งนี้วิธี pseudovirion-based neutralization assay (PBNA) ถูกนำมาใช้ในการทดสอบระดับ neutralizing antibody ในผู้รับวัคซีน บทความนี้รายงานการผลิต pseudovirion สายพันธุ์ 16 (HPV-16 pseudovirion) ซึ่งได้รับการถ่ายทอดวิธีการจาก National Institutes for Food and Drug Control (NIFDC) สาธารณรัฐประชาชนจีน โดยพบว่าหลังเหนี่ยวนำพลาสมิด p16sheLL และ pcDNA3.1 eGFP เข้าสู่เซลล์เพาะเลี้ยง 293FT สามารถผลิต pseudovirion ที่มีโปรตีนเรืองแสง eGFP ได้ภายใน 48 ชั่วโมง และสามารถติดเชื้อเซลล์เพาะเลี้ยง 293FT ได้ เมื่อนับเซลล์เรืองแสงด้วยเครื่อง ELSPOT จะได้ระดับไตเตอร์ของ pseudovirion ที่ทำให้เซลล์เรืองแสง 300 เซลล์ ต่อ 0.1 มิลลิลิตร เป็น 4.37 คำนวณค่าความเจือจางที่สามารถนำไปใช้ในการทดสอบ PBNA ได้เท่ากับ 11,771 เท่า และมีระดับไตเตอร์ที่ทำให้ร้อยละ 50 ของเซลล์มีการติดเชื้อ (TCID50) ต่อ 0.1 มิลลิลิตร เป็น 6.67 คำนวณค่าความเจือจางที่สามารถใช้ในการทดสอบ PBNA เป็น 11,585 เท่า สรุปว่าวิธีนี้สามารถนำมาใช้ในการผลิต HPV-16 pseudovirion ที่สามารถทำให้เซลล์ติดเชื้อและคำนวณค่าไตเตอร์ได้ การผลิต HPV-16 pseudovirion จึงเป็นต้นแบบในการผลิต pseudovirion ของ HPV สายพันธุ์อื่น รวมทั้งใช้ถ่ายทอดองค์ความรู้ให้หน่วยงานที่เกี่ยวข้องกับการผลิตและพัฒนาวัคซีนป้องกันมะเร็งปากมดลูกต่อไป
References
Zhang X, Li S, Modis Y, Li Z, Zhang J, Xia N, et al. Functional assessment and structural basis of antibody binding to human papillomavirus capsid. Rev Med Virol 2016; 26(2): 115-28.
Burd EM. Human papillomavirus and cervical cancer. Clin Microbiol Rev 2003; 16(1): 1-17.
Egawa N, Doorbar J. The low-risk papillomaviruses. Virus Res 2017; 231: 119-27.
Brisson M, Kim JJ, Canfell K, Drolet M, Gingras G, Burger EA, et al. Impact of HPV vaccination and cervical screening on cervical cancer elimination: a comparative modelling analysis in 78 low-income and lower-middleincome countries. Lancet 2020; 395(10224): 575-90.
Wang JW, Roden RB. Virus-like particles for the prevention of human papillomavirus-associated malignancies. Expert Rev Vaccines 2013; 12(2): 129-41.
Yang DY, Bracken K. Update on the new 9-valent vaccine for human papillomavirus prevention. Can Fam Physician 2016; 62(5): 399-402.
Ma B, Roden RB, Hung CF, Wu TC. HPV pseudovirions as DNA delivery vehicles. Ther Deliv 2011; 2(4): 427-30.
Biryukov J, Meyers C. Papillomavirus infectious pathways: a comparison of systems. Viruses 2015; 7(8): 4303-25.
Tsang SH, Basu P, Bender N, Herrero R, Kemp TJ, Kreimer AR, et al. Evaluation of serological assays to monitor antibody responses to single-dose HPV vaccines. Vaccine 2020; 38(38): 5997-6006.
Nie J, Liu Y, Huang W, Wang Y. Development of a triple-color pseudovirion-based assay to detect neutralizing antibodies against human papillomavirus. Viruses 2016; 8(4): 107. (12 pages).
Sehr P, Rubio I, Seitz H, Putzker K, Ribeiro-Müller L, Pawlita M, et al. High-throughput pseudovirion-based neutralization assay for analysis of natural and vaccine-induced antibodies against human papillomaviruses. PLoS One 2013; 8(10): e75677. (11 pages).
Nie J, Huang W, Wu X, Wang Y. Optimization and validation of a high throughput method for detecting neutralizing antibodies against human papillomavirus (HPV) based on pseudovirons. J Med Virol 2014; 86(9): 1542-55.
Buck CB, Pastrana DV, Lowy DR, Schiller JT. Generation of HPV pseudovirions using transfection and their use in neutralization assays. Methods Mol Med 2005; 119: 445-62.
Buck CB, Thompson CD, Pang YY, Lowy DR, Schiller JT. Maturation of papillomavirus capsids. J Virol 2005; 79(5): 2839-46.
Buck CB, Pastrana DV, Lowy DR, Schiller JT. Efficient intracellular assembly of papillomaviral vectors. J Virol 2004; 78(2): 751-7.
Prachasuphap A, Jongpitisub K, Saengtong N, Treeyoung P, Chaiya P, Dhepakson P. Cloning and expression of human monoclonal antibody with potent binding to 2019 novel coronavirus. Bull Dept Med Sci 2020; 62(3): 155-66.
Downloads
เผยแพร่แล้ว
How to Cite
ฉบับ
บท
License
Copyright (c) 2024 วารสารกรมวิทยาศาสตร์การแพทย์
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
