การพัฒนาการตรวจวิเคราะห์โปรตีนหนามของ SARS-CoV-2 ในเซลล์เพาะเลี้ยง 293FT โดยเทคนิค Flow Cytometry เพื่อระบุเอกลักษณ์ของวัคซีนโควิด 19 ชนิด mRNA
การตรวจวิเคราะห์โปรตีนหนามของ SARS-CoV-2 ในเซลล์ 293FT ด้วยเทคนิค Flow Cytometry
คำสำคัญ:
วัคซีนโควิด 19, วัคซีน mRNA, โปรตีนหนาม, Flow cytometry, 293FT cellsบทคัดย่อ
คณะผู้วิจัยได้พัฒนาวิธีวิเคราะห์เอกลักษณ์ของวัคซีนป้องกันโรคโควิด 19 ชนิด mRNA โดยมีสมมติฐานว่าวัคซีนป้องกันโรคโควิด 19 ชนิด mRNA สามารถทําให้เซลล์เพาะเลี้ยง 293FT ผลิตโปรตีนหนามของไวรัส SARS-CoV-2 ที่สามารถตรวจติดตามได้ด้วยการใช้แอนติบอดีที่มีความจําเพาะโดยเทคนิค Flow cytometry ผลการศึกษาพบว่าวัคซีนสามารถเหนี่ยวนําให้เซลล์เพาะเลี้ยงผลิตโปรตีนหนามได้ โดยปริมาณ mRNA แปรผันกับจํานวนเซลล์ที่ย้อมติดโปรตีนหนาม และแอนติบอดีที่ใช้มีความจําเพาะต่อโปรตีนหนามเมื่อเปรียบเทียบกับแอนติบอดีควบคุม โดยเมื่อทดสอบวัคซีน mRNA ที่มีปริมาณ 30 ไมโครกรัม สามารถทําให้เซลล์เพาะเลี้ยงมีการแสดงออกของโปรตีนหนามที่มีค่าเฉลี่ยประมาณร้อยละ 47 เมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ที่ไม่มีการเติมวัคซีนหรือกลุ่มควบคุมที่มีร้อยละจํานวนเซลล์ที่มีโปรตีนหนามน้อยกวาร้อยละ 1 ทั้งนี้ผู้วิจัยมีเป้าหมายที่จะพัฒนาวิธีดังกล่าวให้เป็นวิธีมาตรฐานที่สามารถใช้ได้กับทุกผลิตภัณฑ์ที่อยู่ในรูปแบบวัคซีน mRNA ในอนาคตต่อไป
เอกสารอ้างอิง
Al-Jighefee HT, Najjar H, Ahmed MN, Qush A, Awwad S, Kamareddine L. COVID-19 vaccine platforms: challenges and safety contemplations. Vaccines 2021; 9(10): 1196. (38 pages).
Martínez-Flores D, Zepeda-Cervantes J, Cruz-Reséndiz A, Aguirre-Sampieri S, Sampieri A, Vaca L. SARS-CoV-2 vaccines based on the spike glycoprotein and implications of new viral variants. Front Immunol 2021; 12: 701501. (21 pages).
van Riel D, de Wit E. Next-generation vaccine platforms for COVID-19. Nat Mater 2020; 19(8): 810–2.
Fang E, Liu X, Li M, Zhang Z, Song L, Zhu B, et al. Advances in COVID-19 mRNA vaccine development. Signal transduct Target Ther 2022; 7(1): 94. (31 pages).
Wadhwa A, Aljabbari A, Lokras A, Foged C, Thakur A. Opportunities and challenges in the delivery of mRNA-based vaccines. Pharmaceutics 2020; 12(2): 102. (27 pages).
WHO Expert Committee on Biological Standardization. Evaluation of the quality, safety and efficacy of messenger RNA vaccines for the prevention of infectious diseases: regulatory considerations. WHO Technical Report Series No. 1039. Geneva: World Health Organization; 2022. p. 85–154.
Mahmood T, Yang PC. Western blot: technique, theory, and trouble shooting. N Am J Med Sci 2012; 4(9): 429–34.
Maity B, Sheff D, Fisher RA. Immunostaining: detection of signaling protein location in tissues, cells and subcellular compartments. Methods Cell Biol 2013; 113: 81–105.
Mizrahi O, Ish Shalom E, Baniyash M, Klieger Y. Quantitative flow cytometry: concerns and recommendations in clinic and research. Cytometry B Clin Cytom 2018; 94(2): 211–8.
International Conference on Harmonization Guideline on validation of analytical procedures: text and methodology (ICH Q2(R1)). In: European pharmacopoeia. 11th ed. Strasbourg: Council of Europe; 2023. p. 723–726.
Corbett KS, Edwards DK, Leist SR, Abiona OM, Boyoglu-Barnum S, Gillespie RA, et al. SARS-CoV-2 mRNA vaccine design enabled by prototype pathogen preparedness. Nature 2020; 586(7830): 567–71.
Rauch S, Roth N, Schwendt K, Fotin Mleczek M, Mueller SO, Petsch B. mRNA-based SARS-CoV-2 vaccine candidate CVnCoV induces high levels of virus-neutralising antibodies and mediates protection in rodents. NPH Vaccines 2021; 6(1): 57. (9 pages).
Huo J, Zhao Y, Ren J, Zhou D, Duyvesteyn HM, Ginn HM, et al. Neutralization of SARS-CoV-2 by destruction of the prefusion spike. Cell Host Microbe 2020; 28(3): 445–54.
Hulspas R, O'Gorman MR, Wood BL, Gratama JW, Sutherland DR. Considerations for the control of background fluorescence in clinical flow cytometry. Cytometry B Clin Cytom 2009; 76(6): 355–64.
มงคล เหล่าอารยะ. การใช้ flow cytometry ในงานวิจัยด้านการแพทย์และทางคลินิก. เชียงใหม่เวชสาร 2557; 53(2): 99–109.
Maciorowski Z, Chattopadhyay PK, Jain P. Basic multicolor flow cytometry. Curr Protoc Immunol 2017; 117(1): 5.4.1–38.
ดาวน์โหลด
เผยแพร่แล้ว
รูปแบบการอ้างอิง
ฉบับ
ประเภทบทความ
สัญญาอนุญาต
ลิขสิทธิ์ (c) 2025 วารสารกรมวิทยาศาสตร์การแพทย์
อนุญาตภายใต้เงื่อนไข Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
